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实时PCR如何与COVID-19病毒一起使用?

浏览数量: 2     作者: 本站编辑     发布时间: 2020-08-20      来源: 本站

RT-PCR是用于检测COVID-19病毒的最准确的方法,因为实时RT-PCR技术具有高度的敏感性和特异性,可以在短短三个小时内提供可靠的诊断。与其他可用的病毒分离方法相比,实时RT-PCR显着更快,污染或出错的可能性更低,因为整个过程都可以在封闭的试管中进行。


RT–PCR与COVID-19病毒配合使用的步骤:


从人的鼻子或喉咙收集样品后,用几种化学溶液处理样品,该溶液去除蛋白质和脂肪等物质,仅提取样品中存在的RNA。提取的RNA是人自身遗传物质和病毒RNA(如果存在)的混合物。


使用特定的酶将RNA反转录为DNA。然后,科学家添加了与转录的病毒DNA特定部分互补的其他DNA短片段。如果样品中存在病毒,则这些片段会将自身附着到病毒DNA的目标区域。一些添加的遗传片段在扩增过程中用于构建DNA链,而其他一些则用于构建DNA并向这些链添加标记物标记,然后将其用于检测病毒。


然后将混合物放入RT-PCR仪中。机器在加热和冷却混合物的温度之间循环,以触发特定的化学反应,从而产生新的,相同的病毒DNA靶片段副本。一遍又一遍地重复该循环以继续复制病毒DNA的靶部分。每个循环将前一个数字加倍:两个副本变成四个,四个副本变成八个,依此类推。标准的实时RT-PCR设置通常需要经过35个循环,这意味着到该过程结束时,样品中存在的每条病毒链都会产生约350亿新的病毒DNA片段副本。


构建新的病毒DNA片段后,标记物标签会附着在DNA链上,然后释放出荧光染料,该荧光染料可以通过机器的计算机进行测量,并实时显示在屏幕上。在每个循环后,计算机都会跟踪样品中的荧光量。当超过一定水平的荧光时,这确认该病毒存在。科学家还监视达到此水平所需的周期数,以估计感染的严重程度:周期越短,病毒感染越严重。


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